超微量核酸蛋白測(cè)定儀的比色法
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于超微量核酸蛋白測(cè)定儀的比色法：
BCA、Lowry、Bradford都是通過(guò)比色來(lái)檢測(cè)非純蛋白的濃度的方法。比色法檢測(cè)蛋白濃度時(shí)必須構(gòu)建一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此將這三種測(cè)量蛋白的方法集合在比色法中。
BCA是一種通過(guò)比色來(lái)檢測(cè)非純蛋白的濃度的方法，它通常用于稀釋的蛋白濃度檢測(cè)以及那些含有在紫外區(qū)域有光吸收的雜質(zhì)的蛋白的濃度檢測(cè)。BCA法是檢測(cè)Cu+1離子的方法，在堿性環(huán)境下，Cu＋2離子會(huì)被蛋白還原為Cu+1離子。兩個(gè)聯(lián)喹啉二羧酸BCA分子和一個(gè) Cu+1離子形成紫色的螯合物這樣在有蛋白存在情況下，Cu-BCA形成的螯合物在562nm出有光吸收，以750nm光系數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)化。
商業(yè)化的BCA試劑盒有兩種蛋白檢測(cè)范圍：
常規(guī)檢測(cè)使用試劑/蛋白樣品的體積比為20:1，這個(gè)試劑盒檢測(cè)范圍從0.20mg/到8.0mg/ml（BSA）。當(dāng)使用基座檢測(cè)時(shí)，推薦使用4ul 樣品和80ulBCA試劑。
微量檢測(cè)使用1：1試劑/樣品，可以檢測(cè)蛋白濃度范圍從0.01mg/ml至0.20mg/m要準(zhǔn)備足夠的樣品來(lái)做基座檢測(cè)，建議使用10ul樣品和10ulBCA試劑（使用P管）。
按照試劑盒廠家建議的操作來(lái)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品準(zhǔn)備。確保在所有檢測(cè)過(guò)程使用相同的時(shí)間和溫度。
    注意：如果試驗(yàn)溫度高于60度，最好使用2倍的試驗(yàn)體積，避免揮發(fā)導(dǎo)致樣品減少，從而影響測(cè)試結(jié)果。
Lowry法蛋白定量是一個(gè)應(yīng)用非常廣泛的蛋白定量方法。Lowry法是蛋白與硫酸銅在堿性環(huán)境下反應(yīng)形成銅-蛋白復(fù)合物。Folin－Ciocalteu試劑可以有效的還原銅復(fù)合物，產(chǎn)生與蛋白量成比例的藍(lán)色產(chǎn)物，可以在650nm檢測(cè)，405nm處校準(zhǔn)。試驗(yàn)中使用的試劑可以從多個(gè)廠家購(gòu)買。
要準(zhǔn)確準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品，推薦使用20ul的蛋白樣品和100ul的Lowry試劑來(lái)做反應(yīng)。在本儀器上可以檢測(cè)的樣品濃度范圍是從0.20mg/ml到4mg/ml。按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說(shuō)明來(lái)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。在所有操作過(guò)程中要保持每個(gè)樣品處理時(shí)間和環(huán)境溫度一致。由于本儀器基座檢測(cè)的濃度范圍比常規(guī)檢測(cè)更大，在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)需要構(gòu)建比廠家建議更寬的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍。檢測(cè)需要的樣品量推薦使用2ul。
Bradford是常用的蛋白定量的方法。它通常用于濃度比較低的蛋白的濃度檢測(cè)。Bradford法是根據(jù)蛋白能夠使考馬斯亮藍(lán)嘗試吸收位移來(lái)檢測(cè)蛋白濃度的，一般在595nm處檢測(cè)吸光度。蛋白-染料復(fù)合物在595nm處檢測(cè)并在750nm處做標(biāo)準(zhǔn)化。可以從多個(gè)廠家購(gòu)買相應(yīng)的試劑盒。
商業(yè)化的 Bradford 試劑盒有兩種蛋白檢測(cè)范圍：
常規(guī)檢測(cè)使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1，這個(gè)試劑盒檢測(cè)范圍從0.10mg/ml到8.0mg/ml（BSA）。線形范圍在0.01-1mg/ml。當(dāng)使用基座檢測(cè)時(shí)，推薦使用4ul 樣品和200ul Bradford 試劑。
微量檢測(cè)使用1：1 試劑/樣品，可以檢測(cè)蛋白濃度范圍從15ug/ml 至125ug/ml。要準(zhǔn)備足夠的樣品來(lái)做基座檢測(cè)，建議使用10ul 樣品和10ulBCA 試劑（使用PCR管）。按照試劑盒廠家建議的操作來(lái)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品準(zhǔn)備。確保在所有檢測(cè)過(guò)程中使用相同的時(shí)間和溫度。
    注意：如果試驗(yàn)溫度高于60度，最好使用2倍的試驗(yàn)體積，避免揮發(fā)導(dǎo)致樣品減少，從而影響測(cè)試結(jié)果。    
在Bradford試劑盒中同樣包括用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)品。由于本儀器能夠檢測(cè)比常規(guī)比色皿檢測(cè)更高的濃度，用戶需要使用比廠家推薦的標(biāo)準(zhǔn)品更高的濃度。
5.2 比色法檢測(cè)
注意：比色法檢測(cè)進(jìn)行樣品檢測(cè)前，需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線！
超微量核酸蛋白測(cè)定儀維護(hù)保養(yǎng)秘訣
超微量核酸蛋白測(cè)定儀是精密光學(xué)儀器，出廠前經(jīng)過(guò)精細(xì)的裝配和調(diào)試，如果能對(duì)儀器進(jìn)行恰當(dāng)?shù)木S護(hù)和保養(yǎng)，不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性，也可以延長(zhǎng)儀器使用壽命。
超微量核酸蛋白測(cè)定儀常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
 
超微量核酸蛋白測(cè)定儀的工作原理是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見(jiàn)核酸蛋白測(cè)定儀督有廣泛而重要的應(yīng)用。
 
超微量核酸蛋白測(cè)定儀是精密光學(xué)儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對(duì)保持儀器良好的性能和保證測(cè)試的準(zhǔn)確度有重要作用。下面分享一些超微量核酸蛋白測(cè)定儀不可不知的保養(yǎng)常識(shí)。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
超微量核酸蛋白測(cè)定儀對(duì)工作環(huán)境的要求如下。
①儀器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5～35℃．相對(duì)濕度不超過(guò)85％。
②儀器應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，且避免強(qiáng)烈的振動(dòng)或持續(xù)的振動(dòng)。
③室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)，且應(yīng)避免直射日光的照射。
④電扇不宜直接向儀器吹風(fēng)，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
⑤盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
⑥供給儀器的電源電壓為AC 220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強(qiáng)儀器的抗干擾性能。
⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場(chǎng)所使用。
 
(2)儀器的日常維護(hù)和保養(yǎng)
①光源。光源的壽命有限，為了延長(zhǎng)光源使用壽命，在不使用儀器時(shí)不要開(kāi)光源燈，應(yīng)盡量減少開(kāi)關(guān)次數(shù)。在短時(shí)問(wèn)的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開(kāi)啟。
儀器連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)3h。若需長(zhǎng)時(shí)間使用，最好間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應(yīng)及時(shí)更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過(guò)，要用無(wú)水乙醇擦拭。
②單色器。單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開(kāi)。選擇波長(zhǎng)應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動(dòng)，不可用力過(guò)猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。
③吸收池。必須正確使用吸收池，應(yīng)特別注意保護(hù)吸收池的兩個(gè)光學(xué)面。
④檢測(cè)器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間曝光，且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
⑤當(dāng)儀器停止工作時(shí)，必須切斷電源。
⑥為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作時(shí)，應(yīng)蓋上防塵罩。
⑦儀器若暫時(shí)不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于超微量核酸蛋白測(cè)定儀的比色法。
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